Помимо обследования до начала терапии, анализ на ПЦР РНК ВГС необходим для суждения об исходах лечения.
12 методов в картинках: полимеразная цепная реакция
Может наблюдаться также ложноотрицательный результат ПЦР анализа, который показывает отсутствие вируса при его наличии в организме. Опытный венеролог: как быстро получить результаты анализов ПЦР. Если вам назначили количественный ПЦР-анализ, врач напишет в направлении не только название исследования, но и предпочтительный метод, которым нужно провести ПЦР-анализ.
Получить результаты исследований онлайн
Первый более чувствителен, а второй значительно более информативен. Виды анализов на коронавирусную инфекцию Сдать анализ на коронавирус человек решает или сам, или по направлению врача, заподозрившего у него опасную инфекцию по наличию характерных симптомов. Также лабораторное исследование обязательно выполняется людям из группы риска, например, прибывшим из других стран, недавно контактировавшим с зараженными, ухаживающим за больными. Существует два основных вида анализов, результаты которых с высокой точностью подтверждают или опровергают наличие коронавируса: ПЦР, или полимеразная цепная реакция, направленная на выявления в биологическом образце генетического вирусного материала — РНК; ИФА, или иммуноферментный анализ, предназначенный для обнаружения в крови антител, которые вырабатываются иммунной системой для уничтожения коронавирусов. ПРЦ-диагностика показана преимущественно при наличии симптомов инфекции - сухого кашля, повышенной температуры тела, неспособности различать запахи, проблем с дыханием. Провериться методом ИФА может любой желающий, подозревающий, что ранее переболел коронавирусом. Но данное исследование проведено не будет, если у человека есть хотя бы один признак опасной инфекции. Этим методом можно обследовать и венозную кровь, но выполняется это достаточно редко. Дело в том, что репликация коронавирусов происходит в слизистых оболочках дыхательных путей.
В кровь они проникают только при тяжелом течении болезни. Исследование же мазка позволяет диагностировать инфекцию на самом раннем этапе ее развития. ПРЦ-диагностика считается золотым стандартом выявления острых, подострых, хронических вирусных, бактериальных, грибковых патологий. Затем генетический материал отделяют в процессе электрофореза, вносят в лунки лабораторной посуды, добавляют реагенты и идентифицируют по специфическому окрашиванию.
Принцип работы За генетическую информацию в живом организме любого размера отвечает ДНК — двухспиральная дезоксирибонуклеиновая кислота, состоящая из последовательности четырех нуклеотидов, которые принято обозначать буквами А аденин , Г гуанин , Т тимидин и Ц цитозин. Одно из основных правил генетики — правило комплементарности, то есть нуклеотиды соседних спиралей ДНК соединяются только в определеном порядке: А с Т, Г с Ц, и никак иначе.
Рисунок 1. Схема трех стадий полимеразной цепной реакции. Некоторые виды микроорганизмов, например, вирус иммунодефицита человека, хранят генетическую информацию в другой нуклеиновой кислоте — РНК, но и её фрагменты можно находить с помощью ПЦР. Именно на обнаружении этого небольшого, но уникального для каждого отдельного организма участка и построен принцип ПЦР. Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий. Один цикл ПЦР длится около трёх минут, количество копий растёт в геометрической прогрессии.
Таким образом, за несколько часов количество фрагментов увеличивается в несколько миллиардов раз. Понятно, что теперь определить, какой возбудитель у данной конкретной инфекции, достаточно легко. Достоинства Теория — это, безусловно, замечательно, но что мы имеем на выходе? Какую практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР? Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя.
Бедняга Муллис и его последователи сначала использовали тупо три водяных бани с разной температурой, вручную перемещая из одной в другую ценные пробирки с реакцией. Мы на практике в универе почему-то делали так же... Но как только мир понял, что ПЦР - это офигенно, сразу появились лабораторные приборы, которые этот процесс автоматизируют. Фактически это просто нагревательный блок, способный очень точно держать температуру в течение заданного времени и быстро его менять.
Сейчас их на рынке пруд пруди, на любой вкус и цвет, чуть ли не кофе умеют готовить. Но как нам это все помогает при анализах на вирус? Вот такой милаха прогонит ПЦР за полчасика Медицинское применение. Причем ее может быть изначально очень мало, но цепной характер реакции позволит нам ее приумножить. Но если изначально целевой ДНК в пробе нет, то и реакция не пройдет. Добавляем полимеразу и праймеры, которые сядут именно и только на определенное место в ДНК какого-то интересующего нас патогена ДНК патогена ведь сильно отличается от нашей.
Запускаем реакцию и смотрим, прошла она или нет! Если прошла - значит, пациент был заражен этим патогеном, а на нет и суда нет. Получился очень точный, быстрый и относительно дешевый метод выявления патогенов - прикиньте, раньше пока анализ на какую-нибудь бактерию высеешь на питательную среду, дождешься, чтобы оно подросло, определишь, что выросло - несколько дней пройдет. А тут готовый результат за пару часов! Осталось только подобрать такие праймеры, чтобы они садились "отжигались" действительно только на ДНК патогена, а не на человеческую ДНК. Этот трудоемкий процесс и называется созданием тест-системы - наверняка слышали такое словосочетание в новостях!
Этим занимаются, как правило, крупные компании, вкладывающие в этот процесс большие деньги и время. Но тут что хорошо - один раз подобрал такие праймеры - и все, дальше любой лаборант с минимальным опытом сможет провести сам анализ. Дальнейшее развитие ПЦР пошло по пути ответа на вопрос "прошла реакция или нет? Логичным ответом на него стала ПЦР в реальном времени англ.
Новая система нужна в первую очередь для определения бессимптомных носителей, которые, сами того не подозревая, могут представлять угрозу для окружающих. Кроме того, вирус довольно быстро спускается из верхних дыхательных путей в нижние, и найти его с помощью мазка из носоглотки становится невозможно. В таких случаях поможет ПЦР по крови или мокроте. Также применение разработки может быть актуально при затяжном COVID-19, когда вирусные частицы выделяются только с фекалиями.
Как указано в инструкции, универсальный набор реагентов предназначен для выявления и количественного определения вирусных частиц не только в мазках со слизистой оболочки носо- и ротоглотки, как при стандартном тесте, но и в мокроте, бронхоальвеолярном лаваже, плазме крови, фекалиях, ректальных мазках и аутопсийном материале получают при вскрытии тел умерших.
ПЦР: современные методики диагностики туберкулеза
ПЦР-диагностика метод полимеразной цепной реакции показывает намного более достоверные и ранние результаты: при помощи методики ПЦР возможно выявление генетического материала вируса всего через 10-12 дней после инфицирования, задолго до того момента, когда в крови появятся специфические иммуноглобулины или будет возможным выявление биохимических маркеров нарушения работы печени. Выделяют шесть генотипов и несколько субтипов HCV, которые определяют как особенности болезни и прогнозы для пациента, так и подбор лекарственных средств. Анализ высоко чувствителен и специфичен и считается «золотым стандартом» диагностики заражения и финального контроля эффективности терапии. Так, результат лечения альфа-интерфероном оценивают через 24 недели по окончании курса по наличию или отсутствию РНК HCV в крови. В результатах исследования указывается, есть ли вирус в организме или нет при отсутствии инфицирования или при выздоровлении.
Материалом для исследования может стать не только стандартный мазок из носо- или ротоглотки, но и плазма крови, мокрота, кал, содержимое легких и материалы, полученные при вскрытии умерших. Новая система нужна в первую очередь для определения бессимптомных носителей, которые, сами того не подозревая, могут представлять угрозу для окружающих. Кроме того, вирус довольно быстро спускается из верхних дыхательных путей в нижние, и найти его с помощью мазка из носоглотки становится невозможно. В таких случаях поможет ПЦР по крови или мокроте. Также применение разработки может быть актуально при затяжном COVID-19, когда вирусные частицы выделяются только с фекалиями.
Но в целом ученые сработали очень оперативно. ПЦР полимеразная цепная реакция — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом. Он основан на многократном копировании амплификации определенных участков вирусной ДНК в лабораторных условиях. По факту, чтобы «засечь» вирус в организме, с помощью специального фермента, собирающего из нуклеотидов по образцу вирусной ДНК ее копию, ученые дублируют фрагменты генетического материала вируса, пока их число не станет настолько большим, что будет возможно зафиксировать его присутствие с помощью флуоресцентных меток. Как это работает? Затем добавляют так называемые праймеры — начальные звенья цепочки, которые необходимы для старта синтеза новой копии, и так называемую полимеразу — тот самый фермент, который и будет заниматься репликацией ДНК. РНК-праймер изображен белым прямоугольником в начале каждой из двух цепей Как правило, для лабораторной ПЦР используются ДНК-полимеразы из термофильных бактерий, поскольку в течение реакции смесь многократно охлаждают и нагревают. На последующей стадии элонгации полимераза начинает синтез на каждой из двух цепочек разделенной ДНК недостающей пары. Происходит это по принципу комплементарности: фермент присоединяет напротив каждого нуклеотида, из которых состоят ДНК, противоположный. По завершении реакции цикл неоднократно повторяется см. Общая схема полимераной цепной реакции. Цифрами обозначены ее этапы. В случае с вирусами, содержащими не «двойную» ДНК молекулу, а «одинарную» РНК а это коронавирусы, или, например, ВИЧ , ученым приходится сначала провести обратную транскрипцию РНК с помощью фермента обратной транскриптазы, а уже потом производить амплификацию по той схеме, что была указана выше. Именно так, собственно, поступает и сам вирус, попадая в клетку, перед тем как встроить свою ДНК в человеческую и приступить к синтезу собственных белков, из которых состоит его «тело» то есть не генетического материала, а самих вирусных частиц, при ПЦР же, наоборот, копируется генетический материал, а не новые частицы вируса. Ингибиторы обратной транскриптазы — одни из самых распространенных видов лекарств от ВИЧ-инфекции. К ним относятся, например, зидовудин и ламивудин — самые первые препараты АРВТ, разработанные еще в 80-х. Производится ПЦР на специальных приборах, амплификаторах, или так называемых термоциклерах Thermal cycler.
Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку , а информацию в себе несет не ДНК, а РНК рибонуклеиновые кислоты. РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно. До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы: микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер гарднереллы, кандиды,трихомонады,гонококки ; бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ клинико-диагностическая лаборатория , сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов как правило, 5-7 суток ; иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая — IgM. К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией. Читать еще: На сколько кг можно похудеть за месяц Как происходит сдача анализов на ПЦР В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи. Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ вирус папилломы человека. Мочи достаточно 10 мл, мокроты — субстанции, размером со спичечную головку. Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования: кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак; мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена; как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором своеобразный питательный агар для бактерий ; из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке; как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 — 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры; из ротоглотки забор происходит натощак.
Что такое ПЦР-анализ: как его сдают, как готовиться и для чего он нужен
Анализ на ковид методом ПЦР или полимеразной цепной реакции – информативный способ диагностики коронавирусной инфекции. Разобравшись, чем отличается тест ПЦР от антител на КОВИД, удастся облегчить диагностику коронавирусной инфекции, избежать лишних финансовых трат на несвоевременные или недостоверные обследования. Количественные анализы ПЦР с обратной транскрипцией, как правило, используют при определении вирусной нагрузки ВИЧ и ВГС (количества этих вирусов, присутствующих в крови пациента). Анализ крови ПЦР – это один из самых точных способов выявления в организме некоторых патогенных вирусов. Медицинские анализы: анализ крови, анализ мочи, ПЦР, инфекции, гормоны, ВИЧ, гепатиты, хламидии, генетические исследования, коронавирус, covid-19, SARS-CoV-2. Мы уже в курсе проблемы и прямо сейчас работаем над тем, чтобы все сервисы как можно скорее восстановились.
ПЦР: современные методики диагностики туберкулеза
ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Чтобы анализ на ковид методом ПЦР дал точный результат, необходимо подготовиться к процедуре. Для ПЦР-анализа серонегативных образцов использовали мультиплексные тест-системы CobasTaqScreen MPX Test, разработанные компанией Roche специально для скрининга донорской крови [10]. перед тем как сдать анализ крови на ПЦР, воздержитесь от утреннего приема пищи (анализ сдается натощак) и выпейте стакан чистой негазированной воды.